CENP-B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401356-ACT

CENPB codifica a proteína do centrómero B (CENP-B), um fator de ligação ao DNA específico de sequência que reconhece repetições centroméricas α-satélite e contribui para a organização do centrómero e a montagem do cinetócoro. Por meio de interações com a cromatina centromérica e com o ambiente de nucleossomos contendo CENP-A, a CENP-B sustenta a fidelidade da segregação cromossômica e a progressão mitótica. Alterações na função do centrómero e a instabilidade cromossômica são características comuns da evolução tumoral, tornando a regulação de CENP-B relevante para estudos de aneuploidia, checkpoints do ciclo celular e manutenção do genoma. A CENP-B também é um importante autoantígeno alvo de anticorpos anticentrómero, ligando a biologia de CENPB a investigações sobre autoimunidade direcionada ao centrómero e processamento de antígenos nucleares.

CENP-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CENPB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CENP-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CENPB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CENPB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CENP-B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CENPB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CENP-B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CENP-B em células tumorais com expressão de CENPB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.