CELSR3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405116-ACT

O gene humano CELSR3 (cadherin EGF LAG receptor do tipo G de sete passagens 3) codifica um GPCR de adesão atípico com múltiplas repetições de caderina, que medeia o reconhecimento célula–célula e sinais de polaridade durante a padronização dos tecidos. O CELSR3 atua na sinalização de polaridade planar celular (PCP) e na organização coordenada do citoesqueleto, contribuindo para a migração neuronal, a orientação axonal e a montagem de circuitos sinápticos. Por meio de interações com componentes centrais da PCP, influencia a sinalização direcional e processos morfogenéticos em tecidos em desenvolvimento e maduros. A expressão desregulada de CELSR3 ou o desequilíbrio da rede PCP têm sido associados a fenótipos do neurodesenvolvimento e foram relatados em conjuntos de dados que abrangem contextos neurológicos e oncológicos, sustentando seu uso como um nó mecanístico para estudos focados em vias.

CELSR3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CELSR3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CELSR3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CELSR3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CELSR3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CELSR3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CELSR3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CELSR3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CELSR3 em células tumorais com expressão de CELSR3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.