CEACAM6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401852-ACT

CEACAM6（がん胎児性抗原関連細胞接着分子6）は、上皮系および骨髄系の細胞系列に発現するGPIアンカー型の免疫グロブリンスーパーファミリー分子で、細胞‐細胞および細胞‐細胞外基質（マトリックス）間の相互作用を仲介します。インテグリン関連経路を介した接着依存性シグナル伝達を調節し、細胞骨格動態、上皮極性、バリア構造に影響を与えるほか、上皮環境におけるアノイキス抵抗性や浸潤性行動の制御との関連も示されています。CEACAM6は、細胞表面での相互作用や微生物結合を形成することで自然免疫過程にも関与し、その下流で炎症性シグナル伝達ネットワークに影響を及ぼします。CEACAM6の発現異常は固形腫瘍や炎症性疾患でしばしば観察されるため、ヒトモデル系において腫瘍細胞の可塑性、転移関連形質、ならびに微小環境とのクロストークを研究するための有用な分子ターゲットとなります。

CEACAM6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CEACAM6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CEACAM6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CEACAM6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCEACAM6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CEACAM6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCEACAM6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCEACAM6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCEACAM6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCEACAM6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。