CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419611

概要

マウスのCdkn2bは、CDK4/6活性を抑制してRB依存的なG1/Sチェックポイント制御を維持するサイクリン依存性キナーゼ阻害因子CDKN2B／p15^INK4B^をコードします。TGF-βシグナル伝達などの増殖抑制性シグナルの下流に位置する主要なエフェクターとして、p15は細胞周期停止、系譜分化プログラム、ならびにがん遺伝子ストレスに対する応答の協調に寄与します。Cdkn2bの破綻やエピジェネティックなサイレンシングは、しばしば増殖制御の破綻と関連しており、腫瘍抑制ネットワークや造血系・上皮系の形質転換モデルの文脈で研究されています。Cdkn2bの機能解析は、CDKN2A/B座位、CDK4/6–RB–E2F軸、ならびに細胞老化関連経路と併せて検討されることが一般的です。

CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCdkn2b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cdkn2b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cdkn2bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CDKN2B/p15 INK4Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CDKN2B/p15 INK4Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cdkn2b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CDKN2B/p15 INK4Bの機能に不可欠なCdkn2bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cdkn2bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cdkn2b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CDKN2B/p15 INK4B HDRプラスミド（m）および CDKN2B/p15 INK4B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCdkn2bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCdkn2b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。