CDKN2A/p16 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419610-ACT

O gene Cdkn2a de camundongo codifica o supressor tumoral CDKN2A/p16, um inibidor de quinases dependentes de ciclina que restringe a atividade de CDK4/6 para manter a RB1 em seu estado hipofosforilado e impor o checkpoint de G1/S. Ao limitar a transcrição dirigida por E2F, a p16 integra sinais proliferativos com programas de parada do ciclo celular e é frequentemente acionada durante a senescência replicativa e em respostas a estresse induzido por oncogenes. A desregulação do locus Cdkn2a está intimamente ligada à proliferação aberrante e a estados alterados de senescência, tornando-o um nó central em estudos de controle do ciclo celular, fenótipos associados ao envelhecimento e biologia do câncer em modelos murinos.

CDKN2A/p16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cdkn2a sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CDKN2A/p16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cdkn2a em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cdkn2a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CDKN2A/p16. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cdkn2a nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CDKN2A/p16 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CDKN2A/p16 em células tumorais com expressão de Cdkn2a silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.