Plásmido CRISPR de Activación (h) Cdk8: sc-400577-ACT

CDK8 codifica la quinasa dependiente de ciclina 8 (Cdk8), una subunidad catalítica del módulo quinasa del complejo Mediator que integra señales con la transcripción dependiente de la ARN polimerasa II. Cdk8 regula el inicio y la elongación de la transcripción al modular la actividad de Mediator y fosforilar factores asociados a la transcripción, moldeando así programas de expresión génica específicos del contexto. A través de estas funciones, CDK8 contribuye a vías que controlan la progresión del ciclo celular, la diferenciación, las respuestas al estrés y la señalización inflamatoria, incluida la comunicación cruzada con Wnt/β-catenina y otras redes transcripcionales oncogénicas. La expresión o actividad desregulada de CDK8 se ha vinculado con un control transcripcional alterado en múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudiar la reprogramación transcripcional.

Cdk8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDK8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cdk8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDK8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDK8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cdk8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDK8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cdk8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cdk8 en células tumorales con expresión de CDK8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.