Plásmido CRISPR de Activación (h) Cdc37: sc-401574-ACT

CDC37 codifica Cdc37, un cocochaperón conservado de HSP90 que actúa como andamiaje para quinasas cliente y favorece su plegamiento, estabilización y maduración hasta formar complejos de señalización activos. Al coordinar las interacciones entre HSP90 y las quinasas, Cdc37 contribuye a mantener la proteostasis e influye en vías clave como MAPK/ERK, PI3K–AKT y el control de puntos de control del ciclo celular. Las alteraciones en la expresión o la función de CDC37 pueden desplazar el equilibrio de la red de quinasas, afectando las respuestas al estrés, los programas de proliferación y la estabilidad del proteoma. Estas propiedades hacen de CDC37 un nodo útil para estudiar la regulación dependiente de chaperonas de la señalización oncogénica y adaptativa al estrés, sin implicar resultados clínicos.

Cdc37 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDC37 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cdc37 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDC37 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDC37, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cdc37. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDC37 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cdc37 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cdc37 en células tumorales con expresión de CDC37 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.