Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CD83 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401864-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CD83 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CD83ダブルニカースプラスミド（h）およびCD83ダブルニカースプラスミド（h2）は、CD83を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CD83 抗体 (D-3): sc-55536
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CD83 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401864-NIC | 20 µg | $410.00 |
CD83は、I型膜貫通型の免疫グロブリンスーパーファミリーに属する糖タンパク質をコードしており、樹状細胞の成熟過程で速やかに誘導されます。また、活性化B細胞や一部のT細胞サブセットにも発現します。CD83は、免疫シナプス形成、共刺激シグナル伝達、ならびに細胞表面免疫受容体の安定性と輸送を調節することで、抗原提示およびT細胞プライミングに寄与します。これらの作用は、NF-κBに連関した活性化プログラムやサイトカイン駆動性の分化経路とも交差します。そのためCD83は、免疫寛容、炎症性シグナル、適応免疫の制御といった文脈で広く研究されています。CD83の発現量やシェディング（細胞表面からの遊離）パターンの変化は、自己免疫、慢性炎症、腫瘍と免疫の相互作用における免疫調節異常と関連づけられており、免疫学研究における機序的マーカーとしての利用を支持しています。
CD83 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CD83 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CD83内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CD83の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CD83が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。