CD79B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401760-ACT

CD79B codifica a subunidade Ig-β (B29) do complexo do receptor de antígeno de células B (BCR), formando um heterodímero de sinalização com CD79A que é necessário para a expressão do BCR na superfície celular e para a transdução de sinais desencadeada por antígeno. Após o reconhecimento do antígeno, a fosforilação do ITAM de CD79B inicia a ativação downstream de SYK e a propagação do sinal pelas vias BTK, PI3K–AKT e NF-κB/MAPK, regulando a ativação, a sobrevivência e a diferenciação das células B. Alterações na expressão de CD79B ou na sua competência de sinalização podem remodelar a saída da via do BCR e a dinâmica da sinalização de receptores imunes. A desregulação de componentes da sinalização do BCR, incluindo CD79B, é frequentemente estudada no contexto do desenvolvimento de células B, da disfunção imune e da biologia de neoplasias de células B.

CD79B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD79B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD79B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD79B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD79B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD79B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD79B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD79B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD79B em células tumorais com expressão de CD79B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.