CD79A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401827-ACT

CD79A codifica a subunidade Ig-α do complexo do recetor de antigénio das células B (BCR), que se associa à CD79B para ligar o reconhecimento do antigénio à sinalização intracelular. Os seus motivos de ativação baseados em tirosina do imunorrecetor (ITAMs) são fosforilados para iniciar cascatas dependentes de SYK que envolvem as vias PI3K–AKT, BTK, NF-κB e MAPK, moldando a ativação, a proliferação e a sobrevivência das células B. A expressão de CD79A está intimamente ligada à identidade da linhagem das células B e influencia a seleção impulsionada por antigénio durante o desenvolvimento e a diferenciação. A sinalização desregulada do BCR e alterações na atividade de CD79A estão implicadas em disfunções imunitárias derivadas de células B e na biologia de doenças hematológicas, sustentando a sua utilização como marcador mecanístico em investigação em imunologia e oncologia.

CD79A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD79A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD79A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD79A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD79A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD79A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD79A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD79A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD79A em células tumorais com expressão de CD79A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.