CD3-ζ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400591-ACT

CD247はCD3ゼータ（CD3ζ）鎖をコードしており、抗原依存的なシグナル伝達に必要な免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ITAM）を含むT細胞受容体（TCR）–CD3複合体の必須構成要素である。TCRが刺激されると、CD3ζのリン酸化によりZAP70のリクルートが促進され、LAT/SLP-76シグナロソームを介したシグナル伝播によって下流のMAPK、NF-κB、NFAT経路が活性化される。これによりT細胞の活性化、サイトカイン産生、細胞傷害性エフェクター機能が規定される。CD247の発現量やシグナル伝達能の変化は、免疫調節異常やリンパ球応答の低下と関連しており、腫瘍関連のT細胞機能不全や自己免疫に関連するシグナルの不均衡などが含まれる。適応免疫における近位アダプターとして、CD3ζはT細胞の発生、活性化閾値、ならびに改変受容体のシグナル伝達の研究で頻繁に解析対象となっている。

CD3-ζ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD247の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD3-ζ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD247 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD247転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD3-ζの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD247遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD3-ζ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD247発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD3-ζ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。