Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD28 (m): sc-419541
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- CD28 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique CD28, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD28 Antibody (3H1179): sc-70612
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD28 (m) | sc-419541 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Cd28 code pour CD28, un récepteur co-stimulateur clé exprimé à la surface des lymphocytes T, qui amplifie la signalisation du TCR afin d’assurer une activation complète, la production d’IL‑2, la prolifération et la survie. L’engagement de CD28 par CD80/CD86 sur les cellules présentatrices d’antigène active les programmes PI3K–AKT–mTOR et transcriptionnels NF‑κB/AP‑1, orientant la différenciation effectrice et la reprogrammation métabolique. En fixant les seuils d’activation et en favorisant l’homéostasie des lymphocytes T régulateurs, CD28 influence la tolérance périphérique, l’inflammation chronique et les phénotypes de dysrégulation immunitaire observés dans des modèles murins d’auto-immunité et d’infection. Une signalisation CD28 altérée est également pertinente pour l’étude de l’échappement immunitaire tumoral et de l’immunopathologie, qui interrogent les réseaux de checkpoints et de co-stimulation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD28 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cd28 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cd28, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cd28 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD28.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cd28 pour l'étude de la signalisation de CD28, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Cd28 essentiels à la fonction de CD28
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cd28 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le CD28 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CD28 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cd28. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le CD28 plasmide HDR (m) et le CD28 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cd28 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cd28 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.