CD2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419537-ACT

マウスCd2は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する接着・共刺激受容体であるCD2をコードしており、主としてT細胞およびNK細胞に発現します。CD2はCD48などのリガンドに結合して免疫シナプス形成を安定化し、細胞骨格リモデリングを協調させ、T細胞受容体下流のシグナル伝達を増強することで、Ca²⁺フラックス、MAPK活性化、サイトカイン産生に寄与します。リンパ球の活性化、トラフィッキング、細胞間コミュニケーションにおける役割を通じて、CD2は免疫寛容や炎症応答を制御する経路の研究で頻繁に取り上げられ、自己免疫疾患、感染症、造血器悪性腫瘍のモデルに関連しています。

CD2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cd2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Cd2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCd2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCd2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCd2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。