CD163 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-429989-ACT

O Cd163 de camundongo codifica o CD163, um receptor sequestrador restrito a macrófagos, da família SRCR, que se liga a complexos hemoglobina–haptoglobina e promove sua endocitose, dando suporte ao catabolismo do heme e à reciclagem de ferro por meio da via da HO-1. O CD163 é um marcador característico de macrófagos alternativamente ativados (do tipo M2) e participa de programas de depuração que moldam a resolução da inflamação, as redes de citocinas e a remodelação tecidual. Sua expressão é modulada por sinais inflamatórios e se cruza com a sinalização imune inata e o tráfego fagocítico, influenciando estados de polarização de macrófagos. Alterações nos níveis de CD163 são frequentemente usadas para contextualizar o envolvimento de macrófagos em inflamação crônica, remodelação fibrótica, disfunção metabólica, infecção e biologia de macrófagos associados a tumores em modelos murinos.

CD163 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cd163 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD163 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cd163 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cd163, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD163. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cd163 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD163 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD163 em células tumorais com expressão de Cd163 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.