CCDC90A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406721

Visão geral

MCUR1 (também conhecido como CCDC90A) codifica uma proteína da membrana interna mitocondrial que favorece a captação de cálcio pela mitocôndria ao modular o complexo do uniporte de cálcio mitocondrial. Ao regular os níveis de Ca²⁺ na matriz, a CCDC90A conecta a sinalização de cálcio à fosforilação oxidativa, à atividade de enzimas do ciclo do TCA (ciclo do ácido tricarboxílico) e à homeostase bioenergética celular, com efeitos a jusante sobre espécies reativas de oxigênio e respostas ao estresse. A perturbação da função de MCUR1/CCDC90A tem sido associada a alterações no metabolismo mitocondrial e a maior vulnerabilidade à disfunção mitocondrial, tornando-a relevante para estudos de estresse cardiometabólico, neurobiologia e adaptação metabólica de células cancerígenas. Como um nó de sinalização mitocondrial, é frequentemente investigada em vias que conectam o manejo de cálcio, a suscetibilidade à apoptose e o controle de qualidade mitocondrial.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CCDC90A (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MCUR1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MCUR1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MCUR1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CCDC90A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MCUR1 para a investigação da sinalização de CCDC90A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MCUR1 críticos para a função CCDC90A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MCUR1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CCDC90A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CCDC90A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MCUR1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CCDC90A Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CCDC90A (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MCUR1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MCUR1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.