CCDC57 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-427913

Übersicht

Ccdc57 kodiert das Coiled-Coil-Domänen-enthaltende Protein CCDC57, einen vorausgesagten, mit dem Zytoskelett und Organellen assoziierten Faktor, der an der Organisation mikrotubuliabhängiger Prozesse beteiligt ist. Coiled-Coil-Proteine fungieren häufig als Gerüstproteine, die die Integrität des Zentrosoms, den intrazellulären Transport und den Fortschritt des Zellzyklus unterstützen, und verknüpfen CCDC57 damit mit Signalwegen, die die Dynamik der mitotischen Spindel und die räumliche Regulation von Signalübertragung steuern. In Mausmodellen werden Störungen von Proteinen in diesen Netzwerken häufig im Hinblick auf Auswirkungen auf Proliferation, Genomstabilität und zelluläre Differenzierung untersucht. Damit ist CCDC57 relevant für mechanistische Forschungsbereiche, die sich mit Entwicklungsphänotypen sowie krankheitsassoziierten Defekten der Zytoskelettorganisation und der mitotischen Kontrolle überschneiden.

Das CCDC57 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ccdc57-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ccdc57-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ccdc57 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CCDC57-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ccdc57-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CCDC57-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ccdc57-Exone abzielen, die für die CCDC57-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ccdc57-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CCDC57 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CCDC57 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ccdc57-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CCDC57 HDR-Plasmid (m) und CCDC57 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ccdc57-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ccdc57-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.