Plasmide Double Nickase (h) Cbl-3: sc-407624-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Cbl-3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Cbl-3 Double Nickase (h) et le plasmide Cbl-3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CBLC. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Cbl-3 Antibody (F-2): sc-390648
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Cbl-3 | sc-407624-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Cbl-3 | sc-407624-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CBLC code pour Cbl-3, une ligase E3 ubiquitine de type RING qui agit comme adaptateur pour l’ubiquitination et la diminution de l’expression par endocytose des tyrosine kinases activées, réceptrices ou non. Grâce à sa liaison dépendante du domaine TKB/SH2 à des motifs phosphotyrosine et au recrutement d’enzymes de conjugaison de l’ubiquitine, Cbl-3 contribue à ajuster l’amplitude et la durée des signaux dans des voies associées à la signalisation des facteurs de croissance et des récepteurs immunitaires, notamment les composantes des réseaux MAPK/ERK et PI3K/AKT. L’activité de CBLC participe au contrôle du trafic des récepteurs, de la protéostasie et de la régulation par rétrocontrôle négatif des cascades de signalisation dépendantes de la phosphorylation. Une dérégulation des ligases ubiquitine de la famille CBL et de leurs substrats a été associée à des états de signalisation cellulaire modifiés, pertinents pour la transformation oncogénique et des perturbations de la signalisation hématopoïétique, faisant de CBLC un locus utile pour des études mécanistiques de l’homéostasie des signaux.
Cbl-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CBLC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CBLC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CBLC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CBLC.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.