CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401054-NIC

CNR2はカンナビノイド受容体2（CB2）をコードしており、免疫細胞に豊富に発現するGi/o共役型GPCRです。CB2は、2-AGやアナンダミドなどの内因性カンナビノイドの下流で、cAMPシグナル、MAPK/ERK活性化、PI3K–AKT経路を調節します。CB2シグナルは白血球の遊走、サイトカイン放出、抗原提示細胞の機能、免疫恒常性を制御し、炎症の収束や組織損傷への応答と関連づけられています。CNR2の活性や発現の変化は、自己免疫疾患および炎症性疾患、神経炎症、線維化、腫瘍関連の免疫制御などで報告されており、免疫調節ネットワークの作用機序研究に有用な遺伝子座とされています。CB2はケモカインやToll様受容体（TLR）シグナルともクロストークし、自然免疫・獲得免疫応答を形作る細胞の分極状態にも影響します。

CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CNR2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CNR2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CNR2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CNR2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。