cathepsin L CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400804-ACT

Das humane Gen **CTSL** kodiert **Cathepsin L**, eine lysosomale Cysteinprotease, die den intrazellulären Proteinumsatz sowie die Peptidprozessierung innerhalb des endolysosomalen Systems vermittelt. Cathepsin L trägt zum Autophagie‑Lysosomen‑Flux bei, ist nach Sekretion an der Remodellierung der extrazellulären Matrix beteiligt und wirkt an proteolytischen Aktivierungsereignissen mit, die sich mit Antigenprozessierung und inflammatorischer Signalgebung überschneiden. Eine fehlregulierte CTSL‑Aktivität wurde mit veränderter Tumorzellinvasion und Metastasierung, fibroseassoziiertem Remodelling sowie Pathogen‑Eintrittsprozessen in Verbindung gebracht, die von endosomaler Proteaseaktivität abhängen. Als zentraler Knotenpunkt der Proteostase und lysosomenabhängiger Signalwege wird CTSL häufig in Zusammenhängen untersucht, die zelluläre Stressantworten mit Immunregulation und Gewebeumbau verknüpfen.

cathepsin L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CTSL-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

cathepsin L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CTSL-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CTSL-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen cathepsin L-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CTSL-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von cathepsin L-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des cathepsin L-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CTSL-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.