cathepsin GCRISPR激活质粒(h): sc-402663-ACT

CTSG 编码组织蛋白酶 G（cathepsin G），这是一种由中性粒细胞和单核细胞表达的丝氨酸蛋白酶，储存在嗜天青（azurophilic）颗粒中，并在脱颗粒过程中释放，从而塑造先天免疫反应。组织蛋白酶 G 通过切割多种蛋白底物，参与抗微生物活性和细胞外基质重塑，并与髓系微环境中的炎症信号传导、白细胞趋化以及蛋白酶–抗蛋白酶平衡相互交织。CTSG 活性失调与中性粒细胞驱动的组织损伤和慢性炎症有关，其表达模式的改变也在髓系恶性肿瘤和免疫介导性疾病中受到研究。作为颗粒蛋白酶网络的组成部分，CTSG 常与弹性蛋白酶（elastase）和蛋白酶 3（proteinase 3）一起被用于研究调控宿主防御、血管炎症以及肿瘤–免疫相互作用的相关通路。

cathepsin G CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CTSG的表达。

cathepsin G CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CTSG基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CTSG转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性cathepsin G表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CTSG位点，并能够研究内源性位点上依赖于cathepsin G的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CTSG表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟cathepsin G通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。