Plásmido Doble Nickase (h) CAT: sc-404860-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CAT consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CAT (h) y el plásmido de doble nickasa CAT (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CRAT. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CAT Anticuerpo (654D2Y): sc-517650
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CAT | sc-404860-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CAT | sc-404860-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRAT codifica la carnitina O‑acetiltransferasa (CAT), una enzima de la matriz mitocondrial que cataliza la transferencia reversible de grupos acetilo entre el acetil‑CoA y la carnitina para formar acetilcarnitina. Esta reacción conecta la β‑oxidación de ácidos grasos, el uso del acetil‑CoA derivado del piruvato y el mantenimiento de los reservorios mitocondriales de CoA, influyendo así en el equilibrio redox y la flexibilidad metabólica. Al modular el “buffer” de grupos acetilo y los perfiles de acilcarnitinas, la CAT contribuye a la regulación del metabolismo energético durante cambios de nutrientes y estrés. La desregulación del flujo de acetilo dependiente de carnitina y la acumulación de acilcarnitinas se utilizan ampliamente como lecturas bioquímicas en estudios de síndrome metabólico, resistencia a la insulina y disfunción mitocondrial, lo que convierte a CRAT en un punto útil para el análisis mecanístico.
CAT El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CRAT en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CRAT. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CRAT. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CRAT alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.