caspase-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419468

概要

マウスCasp7はカスパーゼ7をコードしており、カスパーゼ7は内因性および外因性アポトーシスにおいて、開始カスパーゼの下流で活性化される実行カスパーゼ（システイン‐アスパラギン酸プロテアーゼ）です。いったんプロセシングを受けて活性化されると、カスパーゼ7は複数の細胞内基質を切断し、アポトーシスに特徴的な形態変化を引き起こすとともに、ミトコンドリアシグナル、デスレセプター経路、プロテオスタシスストレスに関連する制御された細胞死プログラムに寄与します。カスパーゼ7の活性は、カスパーゼネットワークとのクロストークを介して炎症・免疫シグナルとも連動し、組織リモデリングや細胞傷害性ストレスへの応答にも影響し得ます。CASP7が関与するアポトーシスの破綻は、がん生物学、神経変性、免疫介在性病態に関連する表現型と結び付けられており、Casp7は細胞運命制御の機構解明に有用な解析ノードとなります。

caspase-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCasp7遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Casp7内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Casp7のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、caspase-7タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、caspase-7シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Casp7欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• caspase-7の機能に不可欠なCasp7エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Casp7ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• caspase-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびcaspase-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Casp7遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  caspase-7 HDRプラスミド（m）および caspase-7 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCasp7ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCasp7標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。