Plasmide Double Nickase (h) caspase-3: sc-400049-NIC

CASP3 code la caspase-3, une protéase cystéine-aspartate « exécuteur » centrale qui clive des centaines de substrats et déclenche les caractéristiques biochimiques et morphologiques de l’apoptose. La caspase-3 est activée en aval de la signalisation mitochondriale intrinsèque via Apaf-1/caspase-9 et des voies extrinsèques des récepteurs de mort via la caspase-8, intégrant les signaux de stress au démantèlement cellulaire régulé. Par la protéolyse de cibles telles que PARP1, ICAD et des composants du cytosquelette, la caspase-3 façonne la fragmentation de l’ADN, la formation de blebs membranaires et l’engagement irréversible vers la mort cellulaire programmée. Une activité de CASP3 dérégulée est impliquée dans divers contextes pathologiques où l’apoptose est altérée, notamment la survie des cellules cancéreuses, la neurodégénérescence ainsi que des phénotypes immunitaires et inflammatoires.

caspase-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CASP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CASP3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CASP3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CASP3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.