casein kinase IIα′ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401148-ACT

CSNK2A2 codifica a subunidade catalítica alfa′ da caseína quinase II, uma quinase de serina/treonina constitutivamente ativa que se associa a subunidades regulatórias beta para formar a holoenzima CK2. A CK2 fosforila um amplo espectro de substratos envolvidos na organização da cromatina, na transcrição e no processamento de RNA, na progressão do ciclo celular e nas respostas a dano no DNA, integrando sinais entre vias como Wnt/β-catenina, NF-κB, PI3K/AKT e MAPK. Por meio dessas funções em nível de rede, CSNK2A2 contribui para a regulação da proliferação, da adaptação ao estresse e da apoptose, tornando-se relevante para estudos mecanísticos de sinalização oncogênica, processos do neurodesenvolvimento e modulação de vias inflamatórias. A atividade desregulada de CK2 e a expressão alterada de CSNK2A2 têm sido associadas à biologia tumoral, a programas de fosforilação aberrantes e à homeostase celular perturbada em múltiplos contextos de doença.

casein kinase IIα′ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CSNK2A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

casein kinase IIα′ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CSNK2A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CSNK2A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de casein kinase IIα′. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CSNK2A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de casein kinase IIα′ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via casein kinase IIα′ em células tumorais com expressão de CSNK2A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.