CARP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401842-ACT

O ANKRD1 humano codifica a proteína de repetição anquirina cardíaca (CARP), um cofator transcricional responsivo ao estresse, enriquecido no músculo estriado, que transita entre o sarcômero e o núcleo. A CARP integra sinais mecânicos e hipertróficos ao modular programas de expressão gênica ligados à organização do sarcômero, à remodelação do citoesqueleto e ao desenvolvimento do músculo cardíaco, incluindo interações com reguladores transcricionais como vias de sinalização associadas a YAP/TEAD e NF-κB. A expressão alterada de ANKRD1/CARP tem sido associada à remodelação relacionada a cardiomiopatias e a fenótipos mais amplos de estresse muscular, tornando-a um alvo útil para dissecar a mecanotransdução e a adaptação transcricional. Modelos in vitro que exploram a perturbação de ANKRD1 são comumente aplicados para estudar redes de genes contráteis, a integridade miofibrilar e mudanças transcriptômicas induzidas por estresse.

CARP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANKRD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CARP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANKRD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANKRD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CARP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANKRD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CARP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CARP em células tumorais com expressão de ANKRD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.