CAR1/2 CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m): sc-419458

개요

Nr1i3는 리간드에 의해 조절되는 전사인자인 핵 수용체 constitutive androstane receptor(CAR1/2)를 암호화하며, 마우스의 간과 장에서 외인성 및 내인성 물질을 감지하는 중심 센서로 기능합니다. 활성화되면 CAR은 RXR과 이합체(헤테로다이머)를 형성하고 반응 서열에 결합해 시토크롬 P450 경로, 글루쿠론산 포합, 담즙산 처리 등을 포함한 1/2상 대사효소와 수송체의 발현을 조절합니다. CAR 신호는 산화 스트레스 반응, 지질 및 포도당 대사, 간세포 증식 프로그램과도 교차하여 약물과 환경 화학물질에 대한 적응 반응을 형성합니다. Nr1i3 활성이 조절 이상을 일으키면 약물 체내동태 변화, 담즙정체성 손상에 대한 감수성 증가, 그리고 독성학 및 간질환 모델과 관련된 대사적 표현형과 연관되는 것으로 보고되었습니다.

CAR1/2 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)는 mouse 세포주에서 Nr1i3 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 Nr1i3 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 Nr1i3의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 CAR1/2 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 CAR1/2 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 Nr1i3 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• CAR1/2 기능에 중요한 Nr1i3 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 Nr1i3 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• CAR1/2 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m) 및 CAR1/2 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 Nr1i3 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  CAR1/2 HDR 플라스미드 (m) 및 CAR1/2 HDR 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 Nr1i3 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 Nr1i3 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.