CapZ-α1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405348

Panoramica

CAPZA1 codifica la subunità alfa-1 della proteina di “capping” dei filamenti di actina CapZ, un eterodimero che si lega alle estremità “barbed” della F-actina per regolare l’allungamento dei filamenti, il turnover e l’architettura della rete. Controllando la dinamica dell’actina, CapZ-α1 contribuisce ai processi di rimodellamento del citoscheletro che sono alla base di forma cellulare, adesione e motilità, e interagisce con vie di segnalazione legate all’organizzazione dell’actina e alla meccanotrasduzione. Un’alterata regolazione del capping dell’actina e dei programmi citoscheletrici associati è frequentemente implicata in fenotipi rilevanti per l’invasione delle cellule tumorali, la struttura e la contrattilità dei cardiomiociti e altri contesti in cui il rimodellamento dipendente dall’actina è un determinante chiave del comportamento cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CapZ-α1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CAPZA1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CAPZA1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CAPZA1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CapZ-α1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CAPZA1 per lo studio della segnalazione di CapZ-α1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CAPZA1 critici per la funzione di CapZ-α1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CAPZA1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CapZ-α1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CapZ-α1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CAPZA1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CapZ-α1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CapZ-α1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CAPZA1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CAPZA1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.