CaMKI CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401136-ACT

ヒトCAMK1はCaMKI（カルシウム／カルモジュリン依存性セリン／スレオニンキナーゼ）をコードしており、細胞内Ca2+シグナルを、転写プログラムや細胞骨格ダイナミクス、細胞周期進行を制御するリン酸化イベントへと変換する。CaMKIはCa2+/CaMシグナル伝達ネットワークに組み込まれ、下流のキナーゼカスケードやCREB関連経路を介して神経活動を遺伝子発現に結び付け、神経突起伸長やシナプス可塑性に関連する過程を支える。神経系以外でも、CAMK1活性は増殖やストレス応答に影響するより広範なシグナル文脈で関与が示唆されており、複雑な疾患に共通してみられるシグナル制御異常の機序研究において重要である。Ca2+依存性キナーゼシグナルの変調は、神経発達・神経変性の表現型や、がんに伴う経路再配線としばしば関連することから、CAMK1は経路解析のための有用なノードとして位置付けられる。

CaMKI CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CAMK1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CaMKI CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CAMK1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCAMK1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CaMKIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCAMK1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCaMKI依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCAMK1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCaMKI経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。