CaM IICRISPR激活质粒(h): sc-400952-ACT

人类 CALM2 基因编码钙调蛋白（CaM II），这是一种广泛存在的 Ca2+ 传感器。它通过结合并调控多种酶、离子通道和转录调控因子，将细胞内钙瞬变转化为调节性信号。借助 Ca2+/钙调蛋白依赖的信号传导，CALM2 参与兴奋–收缩耦联、突触可塑性、细胞周期控制以及刺激依赖的基因表达等过程，并与 CaMK 信号、钙调神经磷酸酶（calcineurin）/NFAT 激活以及 GPCR 启动的 Ca2+ 动态等通路发生交汇。CALM2 介导的 Ca2+ 缓冲与信号解码有助于维持线粒体功能和膜兴奋性，从而塑造下游的磷酸化网络与钙稳态。钙调蛋白信号的失调以及致病性 CALM2 变异与致心律失常表型及更广泛的神经-心脏功能障碍相关，因此 CALM2 是研究钙驱动疾病生物学机制的重要靶点。

CaM II CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CALM2的表达。

CaM II CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CALM2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CALM2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CaM II表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CALM2位点，并能够研究内源性位点上依赖于CaM II的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CALM2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CaM II通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。