Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Calpain 2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401113
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Calpain 2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Calpain 2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Calpain 2 Anticuerpo (E-10): sc-373966
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Calpain 2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401113 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CAPN2 codifica la calpaína 2, una proteasa de cisteína ubicua dependiente de Ca²⁺ que realiza proteólisis limitada de proteínas del citoesqueleto y de señalización para remodelar la arquitectura celular. La actividad de la calpaína 2 contribuye al recambio de las adhesiones focales, al tráfico de membranas y a la modulación de la señalización mediada por quinasas y fosfatasas, intersectando con vías que controlan la migración, la supervivencia y las respuestas al estrés. Mediante el corte regulado de sustratos implicados en la progresión del ciclo celular y la apoptosis, CAPN2 ayuda a ajustar la proteostasis y la señalización adaptativa durante la inflamación y la remodelación tisular. La desregulación de la actividad de la calpaína 2 se ha asociado con motilidad aberrante y fenotipos invasivos, procesos neurodegenerativos vinculados a la entrada excitotóxica de calcio y respuestas alteradas al estrés oxidativo o mecánico.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Calpain 2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CAPN2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CAPN2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CAPN2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Calpain 2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CAPN2 para la investigación de la señalización de Calpain 2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CAPN2 críticos para la función de Calpain 2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CAPN2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Calpain 2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Calpain 2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CAPN2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Calpain 2 (h) y el plásmido HDR Calpain 2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CAPN2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CAPN2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.