CALM CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-433276

概要

Picalm（phosphatidylinositol binding clathrin assembly protein）は、細胞質アダプターであるCALMをコードしており、エンドサイトーシスにおいてホスホイノシチド結合をクラスリン被覆ピットの形成およびカーゴ選別と結び付ける役割を担います。CALMは受容体の内在化、シナプス小胞のリサイクリング、エンドソーム輸送を制御し、その結果として膜恒常性や下流シグナル伝達のダイナミクスに影響を与えます。マウス系では、Picalmの機能攪乱により細胞内輸送経路やオートファジー‐リソソームフラックスが変化し得ることが示されており、これらの過程は神経系および造血系の文脈でしばしば検討されます。遺伝学的・機能的研究により、PICALM/CALMの生物学は、神経変性に関連する輸送異常や、受容体ターンオーバーおよび小胞輸送の変化を介した細胞増殖プログラムの破綻と関連付けられてきました。

CALM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPicalm遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Picalm内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Picalmのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CALMタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CALMシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Picalm欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CALMの機能に不可欠なPicalmエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Picalmゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CALM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCALM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Picalm遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CALM HDRプラスミド（m）および CALM HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPicalmホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPicalm標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。