Plásmido CRISPR de Activación (h) cadherin-22: sc-401942-ACT

CDH22 codifica la cadherina-22, un receptor de adhesión célula–célula dependiente de calcio dentro de la superfamilia de las cadherinas, que sostiene la arquitectura tisular mediante interacciones homofílicas y su acoplamiento a las cateninas y al citoesqueleto de actina. Al modular el ensamblaje de las uniones adherentes y la señalización dependiente del contacto, la cadherina-22 puede influir en la organización epitelial y neuronal, la polaridad celular y el comportamiento migratorio. Los patrones alterados de expresión de cadherinas se asocian con frecuencia a una adhesión desregulada, fenotipos vinculados a la invasión y la remodelación del microambiente tumoral, lo que convierte a CDH22 en una diana relevante para estudios mecanísticos de la comunicación célula–célula. La expresión de CDH22 también se ha investigado en contextos de especificación de linaje y diferenciación, donde la adhesión mediada por cadherinas se entrecruza con programas del desarrollo.

cadherin-22 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDH22 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

cadherin-22 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDH22 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDH22, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de cadherin-22. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDH22 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de cadherin-22 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía cadherin-22 en células tumorales con expresión de CDH22 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.