Plasmide CRISPR/Cas9 KO CA II (h): sc-401059

Présentation

L’anhydrase carbonique II (CA II), codée par le gène humain **CA2**, est une métallenzyme cytosolique à très forte activité qui catalyse l’hydratation réversible du CO₂ en bicarbonate et protons, régulant ainsi le pH intracellulaire, le transport du CO₂ et la disponibilité en bicarbonate. Grâce à son couplage avec les transporteurs de bicarbonate et les mécanismes de gestion des protons, CA II soutient l’homéostasie acido-basique dans divers tissus et contribue à des processus tels que le transport ionique épithélial, la résorption osseuse médiée par les ostéoclastes et les échanges gazeux des érythrocytes. L’activité de CA2 s’inscrit également dans la régulation métabolique sensible au pH et les réponses au stress cellulaire, où une altération de la fonction des anhydrases carboniques peut influencer la signalisation et l’activité enzymatique en aval de la dynamique des protons. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de CA2 ont été associées à des troubles de l’équilibre acido-basique et de la minéralisation, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la physiologie dépendante du pH et de phénotypes cellulaires pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CA II (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CA2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CA2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CA II.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CA2 pour l'étude de la signalisation de CA II, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CA2 essentiels à la fonction de CA II
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CA2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CA II plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CA II plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CA2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CA II plasmide HDR (h) et le CA II (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CA2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CA2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.