C530008M17Rik CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-435830

Übersicht

C530008M17Rik kodiert ein Mausprotein, das bislang nur unvollständig charakterisiert ist; aus aktuellen genomischen Ressourcen liegen nur begrenzte funktionelle Annotationen vor. Als vorhergesagtes Genprodukt wird es häufig im Kontext transkriptomischer und proteomischer Datensätze untersucht, um zelltypspezifische Expressionsmuster und mögliche subzelluläre Funktionen zu bestimmen. Erste Hinweise aus Koexpressionsanalysen und genetischen Perturbations-Screens können dazu beitragen, C530008M17Rik – abhängig vom jeweiligen experimentellen System – in übergeordnete zelluläre Prozesse wie Differenzierung, Stressantworten oder gewebespezifische Homöostase einzuordnen. Aufgrund der spärlichen mechanistischen Daten werden häufig gezielte Knockout-Ansätze eingesetzt, um die Beteiligung an Signalwegen und mögliche Zusammenhänge mit Phänotypen zu klären, die für Entwicklungsbiologie und Krankheitsmodellierung relevant sind.

Das C530008M17Rik CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des C530008M17Rik-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des C530008M17Rik-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von C530008M17Rik nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die C530008M17Rik-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von C530008M17Rik-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der C530008M17Rik-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf C530008M17Rik-Exone abzielen, die für die C530008M17Rik-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere C530008M17Rik-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom C530008M17Rik CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom C530008M17Rik CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des C530008M17Rik-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das C530008M17Rik HDR-Plasmid (m) und C530008M17Rik HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von C530008M17Rik-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten C530008M17Rik-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.