C19orf66 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408037-ACT

C19orf66は、インターフェロン刺激によって誘導されるタンパク質（shiftless／SHFLとも呼ばれる）をコードしており、ウイルスRNAの翻訳を調節し、ウイルスタンパク質の蓄積を変化させることで、多様なウイルスの複製を制限します。I型インターフェロンの下流に位置する自然免疫シグナル伝達に関与し、感染細胞におけるRNA代謝やタンパク質合成を再編する抗ウイルス実行プログラムに寄与します。C19orf66はRNAの安定性や翻訳制御を司る経路と関連づけられており、その活性は、宿主—病原体相互作用に影響する細胞ストレス応答とも交差します。C19orf66を含むインターフェロン刺激遺伝子ネットワークの制御異常は、慢性炎症、ウイルス感受性、免疫関連疾患の表現型に関する研究において重要です。

C19orf66 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C19orf66の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C19orf66 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における C19orf66 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC19orf66転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C19orf66の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC19orf66遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC19orf66依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC19orf66発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC19orf66経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。