C17orf59 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412334

Visão geral

BORCS6 (C17orf59) é um componente central do BORC (complexo relacionado ao BLOC-1) que regula o posicionamento e o transporte anterógrado de lisossomos ao longo de microtúbulos, moldando a distribuição de organelas e processos periféricos dependentes de lisossomos. Por meio do acoplamento dependente de BORC a Arl8 e a motores de cinesina, o C17orf59 contribui para a dinâmica do tráfego endolisossomal que influencia a função autofagia–lisossomo, a sinalização de nutrientes e a remodelação de membranas. A perturbação da atividade do BORC pode desorganizar a dispersão de lisossomos e o manejo de cargas, associando essa via a respostas celulares ao estresse e a fenótipos relevantes para a neurobiologia e a função de células imunes. Como um gene humano envolvido na logística de organelas, o BORCS6 é frequentemente estudado no contexto do transporte intracelular, do metabolismo dirigido por lisossomos e de defeitos de tráfego associados a mecanismos complexos de doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO C17orf59 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene BORCS6 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do BORCS6, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do BORCS6 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína C17orf59.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de BORCS6 para a investigação da sinalização de C17orf59, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) BORCS6 críticos para a função C17orf59
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos BORCS6 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo C17orf59 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo C17orf59 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus BORCS6. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo C17orf59 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR C17orf59 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia BORCS6 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo BORCS6 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.