Plasmide CRISPR d'Activation (h) C16orf74: sc-408367-ACT

C16orf74 code une protéine humaine encore mal caractérisée, dont l’annotation fonctionnelle est limitée, et les données actuelles suggèrent qu’elle pourrait participer à une régulation contextuelle de l’expression génique et de l’état cellulaire. Des études au niveau des transcrits rapportent une expression variable de C16orf74 selon les tissus et les systèmes expérimentaux, ce qui soutient son utilisation comme marqueur pour explorer des programmes transcriptionnels associés à la différenciation et au stress. Bien que son positionnement définitif dans des voies biologiques reste incomplet, C16orf74 est fréquemment analysé dans des jeux de données multi-omiques afin d’identifier des réseaux co-régulés liés à la prolifération, aux signalisations de survie et à l’identité cellulaire. Des modifications d’expression ont été observées dans des signatures d’expression pertinentes pour certaines maladies, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles cellulaires, sans pour autant impliquer une utilité clinique.

C16orf74 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C16orf74 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C16orf74 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C16orf74 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C16orf74, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C16orf74. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C16orf74 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C16orf74 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C16orf74 dans les cellules tumorales présentant une expression de C16orf74 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.