C14orf37 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-414550-ACT

C14orf37 (humano) codifica uma proteína pouco caracterizada, com anotação funcional limitada, e as evidências atuais sugerem que pode contribuir para a regulação dependente do contexto da expressão gênica e da homeostase celular. Estudos em nível de transcrito indicam que a expressão de C14orf37 pode variar entre tecidos e sob diferentes perturbações experimentais, tornando-a um locus candidato para investigar o controle transcricional e transições de estado celular. Embora a atribuição definitiva a vias ainda seja incompleta, associações emergentes de genômica e perfilamento de expressão relacionam C14orf37 a programas biológicos relevantes para proliferação, diferenciação e sinalização responsiva ao estresse. Como resultado, C14orf37 é de interesse para estudos mecanísticos que conectem a dosagem endógena do gene a fenótipos observados em modelos celulares relevantes para doenças.

C14orf37 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C14orf37 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C14orf37 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C14orf37 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C14orf37, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C14orf37. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C14orf37 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C14orf37 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C14orf37 em células tumorais com expressão de C14orf37 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.