Plasmide CRISPR d'Activation (h) c-Myb: sc-400752-ACT

MYB code le facteur de transcription c-Myb, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique de la séquence, qui contrôle des programmes gouvernant la prolifération, l’engagement de lignée et la différenciation, en particulier au sein des compartiments hématopoïétiques et des cellules immunitaires. c-Myb intègre des signaux issus des réseaux transcriptionnels des cytokines et du développement afin de moduler la progression du cycle cellulaire, la survie et la maturation grâce à une régulation coordonnée de gènes cibles en aval. Une activité de MYB dérégulée a été associée à des états de différenciation altérés et à un maintien de signaux prolifératifs dans de multiples contextes pertinents pour les cancers, notamment les leucémies et les lymphomes, et elle est également impliquée dans le remodelage transcriptionnel de certains cancers solides. Ces propriétés font de MYB un nœud clé pour disséquer les circuits de régulation génique, la transcription dépendante de la chromatine et les décisions de destinée cellulaire spécifiques du contexte.

c-Myb Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

c-Myb Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de c-Myb. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de c-Myb au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie c-Myb dans les cellules tumorales présentant une expression de MYB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.