Plásmido CRISPR de Activación (h) c-Mpl: sc-403035-ACT

MPL codifica el receptor de trombopoyetina c‑Mpl, un receptor de citocinas de clase I que regula el mantenimiento de las células madre y progenitoras hematopoyéticas y promueve la proliferación de megacariocitos y la producción de plaquetas. Tras la unión de la trombopoyetina, c‑Mpl señaliza a través de las vías JAK2/STAT5, MAPK/ERK y PI3K/AKT para coordinar la supervivencia, la diferenciación y programas transcripcionales sensibles a citocinas. La señalización o la expresión desreguladas de MPL se asocian con una hematopoyesis aberrante y se estudian con frecuencia en el contexto de neoplasias mieloproliferativas y síndromes hereditarios de trombocitopenia. Como receptor de superficie con lecturas downstream bien definidas, c‑Mpl constituye un punto accesible para investigar la señalización por citocinas, el compromiso de linaje y la hematopoyesis de estrés en modelos celulares humanos.

c-Mpl El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MPL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

c-Mpl El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MPL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MPL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de c-Mpl. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MPL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de c-Mpl en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía c-Mpl en células tumorales con expresión de MPL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.