C/EBP δ Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419624-ACT

Cebpd codifica o fator de transcrição C/EBP delta (CEBPδ), um membro da família de proteínas ligantes de CCAAT/enhancer que coordena programas de expressão gênica responsivos a estímulos nos compartimentos imune e estromal. Em células de camundongo, o C/EBPδ é rapidamente induzido por sinais inflamatórios e estresse celular, integrando a sinalização de vias ativadas por citocinas e redes transcricionais a jusante para regular a diferenciação, respostas de fase aguda e o controle do ciclo celular. Por meio de seus domínios de ligação ao DNA e de transativação, o C/EBPδ molda enhancers com cromatina acessível e modula genes envolvidos na imunidade inata, no metabolismo e no remodelamento tecidual. A atividade desregulada de Cebpd tem sido associada à patobiologia inflamatória e a estados proliferativos alterados, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de circuitos transcricionais de resposta ao estresse.

C/EBP δ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cebpd sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C/EBP δ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cebpd em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cebpd, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C/EBP δ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cebpd nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C/EBP δ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C/EBP δ em células tumorais com expressão de Cebpd silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.