BTG4 Lentiviral Activation Particles (h): sc-408621-LAC

BTG4 (B-cell translocation gene 4) kodiert ein Mitglied der BTG/TOB-Familie antiproliferativer Proteine, die an der posttranskriptionellen Genregulation und der Kontrolle des Fortschreitens des Zellzyklus beteiligt sind. BTG4 ist am besten für seine Rollen bei der Deadenylierung und dem Abbau von mRNA durch Interaktionen mit Komponenten des CCR4–NOT-Komplexes charakterisiert und trägt so zur zeitlichen Regulation von Genexpressionsprogrammen während Zellzustandsübergängen bei. Über seinen Einfluss auf die Stabilität von Transkripten und proliferationsassoziierte Signalwege wurde eine veränderte BTG4-Aktivität mit fehlreguliertem Zellwachstum sowie Differenzierungsphänotypen in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und für reproduktive/entwicklungsbiologische Prozesse relevant sind. Humanes BTG4 dient daher als nützlicher Knotenpunkt für die Untersuchung des RNA-Metabolismus, von Zellzyklus-Checkpoints und regulatorischen Netzwerken, die das Zellschicksal prägen.

BTG4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente BTG4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

BTG4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der BTG4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen BTG4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen BTG4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.