BTEB2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401680-ACT

KLF5 (BTEB2) codifica um fator de transcrição do tipo Kruppel com dedos de zinco, que se liga a elementos promotores ricos em GC para regular programas que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação epitelial e a remodelação tecidual. Ele integra sinais das vias MAPK/ERK e TGF-β/SMAD e coordena respostas transcricionais que influenciam a proliferação, a migração e a dinâmica da matriz extracelular. A atividade desregulada de KLF5 tem sido associada a fenótipos oncogênicos e inflamatórios em múltiplos tecidos, tornando-o um nó amplamente utilizado para estudar o controle transcricional do crescimento e as respostas ao estresse. Em modelos de células humanas, a perturbação de BTEB2 ajuda a dissecar redes de regulação gênica dependentes do contexto e o “cross-talk” entre vias que sustentam estados celulares associados a doenças.

BTEB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KLF5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BTEB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KLF5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KLF5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BTEB2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KLF5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BTEB2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BTEB2 em células tumorais com expressão de KLF5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.