Plasmide CRISPR/Cas9 KO BTBD2 (m): sc-431551

Présentation

Btbd2 code BTBD2, une protéine contenant un domaine BTB/POZ, supposée agir comme adaptateur au sein de réseaux d’interactions protéine–protéine qui influencent la protéostasie dépendante de l’ubiquitine et le renouvellement régulé de facteurs cellulaires. Les processus associés à BTBD2 ont été reliés au contrôle de l’amplitude des signaux et des voies de réponse au stress, via la modulation de la stabilité des protéines, avec des effets en aval sur la progression du cycle cellulaire et les programmes de différenciation. Dans les systèmes murins, la perturbation de Btbd2 constitue un moyen d’examiner comment les échafaudages à domaine BTB contribuent à l’homéostasie tissulaire et aux phénotypes du développement. Une protéostasie dérégulée et un contrôle anormal de la signalisation sont largement pertinents en biologie des maladies, notamment dans des contextes impliquant des défauts prolifératifs et une vulnérabilité neurodéveloppementale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BTBD2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Btbd2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Btbd2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Btbd2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BTBD2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Btbd2 pour l'étude de la signalisation de BTBD2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Btbd2 essentiels à la fonction de BTBD2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Btbd2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BTBD2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le BTBD2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Btbd2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BTBD2 plasmide HDR (m) et le BTBD2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Btbd2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Btbd2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.