Brn-3c/BRN3C/POU4F3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401701-ACT

POU4F3 (Brn-3c/BRN3C) ist ein Transkriptionsfaktor mit POU-Domäne, der Genexpressionsprogramme reguliert, die für die Differenzierung und Aufrechterhaltung sensorischer Zellen erforderlich sind, und dessen Rollen in der Entwicklung von Haarzellen des Innenohrs sowie in der Spezifizierung neuronaler Linien gut charakterisiert sind. Durch die Bindung an octamerähnliche DNA-Motive koordiniert BRN3C transkriptionelle Netzwerke, die sich mit entwicklungsbiologischen Signalwegen und einer chromatinvermittelten Kontrolle der Zellidentität überschneiden. Eine veränderte Aktivität oder Expression von POU4F3 wurde mit hereditären Hörstörungen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext von Haarzellüberleben, Stressantworten und Degeneration untersucht. Diese Eigenschaften machen POU4F3 zu einem nützlichen Marker und zu einem mechanistischen Knotenpunkt für die Untersuchung transkriptioneller Regulation in der sensorischen Neurobiologie.

Brn-3c/BRN3C/POU4F3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen POU4F3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Brn-3c/BRN3C/POU4F3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des POU4F3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der POU4F3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Brn-3c/BRN3C/POU4F3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native POU4F3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Brn-3c/BRN3C/POU4F3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Brn-3c/BRN3C/POU4F3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem POU4F3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.