BRD4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400519-ACT

Il gene umano **BRD4** codifica una proteina con bromodominio della famiglia BET che si lega agli istoni acetilati per regolare l’accessibilità della cromatina e la trascrizione dipendente dall’RNA polimerasi II. BRD4 coordina l’allungamento trascrizionale tramite P-TEFb e sostiene l’attività di enhancer e super-enhancer, modellando programmi associati alla progressione del ciclo cellulare, alle risposte al danno del DNA e alla segnalazione infiammatoria, come quella mediata da NF-κB. Attraverso queste funzioni epigenetiche, BRD4 influenza l’espressione genica specifica di linea e le transizioni dello stato cellulare. L’attività deregolata di BRD4 e il rimodellamento degli enhancer sono spesso oggetto di studio in oncologia, nella biologia immuno-mediata e nel controllo trascrizionale virus–ospite, rendendo BRD4 un nodo centrale nella ricerca su trascrizione e cromatina.

BRD4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BRD4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BRD4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BRD4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BRD4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BRD4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BRD4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BRD4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BRD4 nelle cellule tumorali con espressione di BRD4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.