BRCA2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400700-ACT

ヒトBRCA2は腫瘍抑制因子をコードしており、DNA二本鎖切断の高忠実度修復を相同組換えによって行ううえで不可欠である。BRCA2は、切除されたDNAへのRAD51の装填を介して相同組換えを促進し、S期には複製フォークを安定化させる。さらにBRCA2はファンコニ貧血／BRCAネットワークの一員として、DNA鎖間架橋の解決やチェックポイントシグナルの調整を担い、ゲノム完全性の維持に寄与する。BRCA2の機能障害または活性低下は染色体不安定性を増大させ、悪性腫瘍への感受性を高めるため、DNA損傷応答研究における中心的な遺伝子となっている。BRCA2の状態は、複製ストレスや遺伝毒性因子に対する細胞感受性にも影響し、ゲノム維持およびがん生物学研究における幅広い応用を支えている。

BRCA2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BRCA2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BRCA2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BRCA2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBRCA2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BRCA2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBRCA2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBRCA2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBRCA2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBRCA2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。