bradykinin B1 R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401169-ACT

BDKRB1 codifica o receptor B1 da bradicinina (bradykinin B1 R), um receptor acoplado à proteína G induzível, cuja expressão é aumentada por citocinas inflamatórias e por lesão tecidual. Após a ligação de peptídeos de bradicinina des-Arg, o bradykinin B1 R sinaliza via Gαq/PLCβ para elevar o Ca²⁺ intracelular e ativar a PKC, e também pode acionar as vias de MAPK e NF-κB para modular a produção de quimiocinas, a permeabilidade vascular e o tráfego de leucócitos. A expressão é tipicamente baixa em tecidos em homeostase, mas aumenta em endotélio ativado, músculo liso e células imunes, ligando o BDKRB1 a programas inflamatórios e nociceptivos. A sinalização desregulada de BDKRB1 tem sido associada à inflamação crônica, à biologia da dor neuropática, à disfunção vascular e a contextos de remodelamento tecidual relevantes para a pesquisa cardiometabólica e neuroinflamatória.

bradykinin B1 R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BDKRB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

bradykinin B1 R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BDKRB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BDKRB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de bradykinin B1 R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BDKRB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de bradykinin B1 R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via bradykinin B1 R em células tumorais com expressão de BDKRB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.