BORIS Double Nickaseプラスミド (h): sc-403313-NIC

CTCFLは、BORIS（Brother of the Regulator of Imprinted Sites）をコードする遺伝子である。BORISはCTCFに関連するがん・精巣型の転写調節因子で、配列特異的にDNAへ結合し、クロマチン構造の形成や遺伝子発現プログラムに影響を与える。BORISは、インプリンティング制御やクロマチンアクセシビリティの調節などのエピジェネティック制御に関与し、転写の絶縁（インシュレーション）、エンハンサー—プロモーター間のコミュニケーション、生殖細胞系列に関連した転写ネットワークといった過程とも交差しうる。BORISの異常発現は多様な腫瘍状況で報告されており、エピジェネティック状態の破綻、転写回路の変化、ゲノム安定性に関わる表現型との関連からしばしば研究対象となっている。通常の組織での発現が限定的なヒト遺伝子として、CTCFLはクロマチン依存的な転写制御や腫瘍性リプログラミングの機構を検討するうえで有用なモデルである。

BORIS ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CTCFL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CTCFL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CTCFLの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CTCFLが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。