Plasmide CRISPR d'Activation (h) BMP-9: sc-402887-ACT

GDF2 code la bone morphogenetic protein 9 (BMP-9), un ligand sécrété de la superfamille du TGF-β qui transmet son signal principalement via des récepteurs de type I tels qu’ALK1 et des récepteurs de type II incluant BMPR2, afin d’activer une transcription dépendante de SMAD1/5/9. Dans les cellules humaines, BMP-9 contribue à réguler la quiescence endothéliale, le remodelage vasculaire et l’équilibre angiogénique, et influence également, de manière dépendante du contexte, des programmes géniques ostéogéniques et métaboliques. L’activité de la voie BMP-9 s’inscrit au carrefour des interactions BMP/TGF-β, de la régulation de la matrice extracellulaire et de la signalisation inflammatoire, orientant les décisions de destinée cellulaire au sein des compartiments vasculaires, hépatiques et mésenchymateux. Une dérégulation de la signalisation BMP-9/GDF2 a été associée dans la littérature à des processus pathologiques vasculaires, notamment à des troubles héréditaires et acquis de la fonction endothéliale et du remodelage, ce qui étaye sa pertinence comme cible de recherche en biologie cardiovasculaire et du développement.

BMP-9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GDF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BMP-9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GDF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GDF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BMP-9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GDF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BMP-9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BMP-9 dans les cellules tumorales présentant une expression de GDF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.